维生素E对中华绒螯蟹饲料脂肪利用的保护作用研究

【摘要】本论文以中华绒螯蟹幼蟹为研究对象,较为系统地探讨了维生素E与脂肪、高度不饱和脂肪酸、氧化脂肪及维生素C之间的相互作用。本文重点研究了维生素E对中华绒螯蟹饲料脂肪利用的保护作用。试验结果表明,维生素E可以保护脂肪在体内利用中免受脂质过氧化、缓解氧化脂肪对幼蟹造成的损伤作用,并从分子层面进一步探讨了维生素E的抗氧化性能。本研究结果可以为中华绒螯蟹全价配合饲料的研制中经常遇到的脂肪氧化问题提供解决方案。1.饲料中不同脂肪和维生素E水平对中华绒螫蟹幼蟹生长、抗氧化及抗病力的影响维生素E在保护脂质过氧化和提高水产动物的免疫性能方面有重要作用。为了评价维生素E和脂肪水平对中华绒螯蟹幼蟹的影响,进行了为期10周的养殖试验。饲料包含三个维生素E水平(0,100和300mgkg-1饲料)和两个脂肪水平(6%和9%)。结果显示,幼蟹肝胰腺中的维生素E含量与饲料中的维生素E含量成正相关；维生素E和9%脂肪水平显著提高了肝胰腺中不饱和脂肪酸(PUFA)和高度不饱和脂肪酸(HUFA)的组成百分比；维生素E显著提高了幼蟹血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶和酚氧化酶活力；维生素E100mgkg-1饲料组幼蟹肝胰腺中MDA含量显著低于维生素EO或300mgkg-1饲料组；9%脂肪水平组幼蟹的血清酚氧化酶活力显著高于6%脂肪水平组；维生素E的添加显著提高了幼蟹抵抗细菌感染能力。本研究显示不同脂肪和维生素E水平没有显著影响幼蟹的生长和成活率,但是添加维生素E100mgkg-1可以提高幼蟹的免疫力和抗氧化能力。2.饲料中不同维生素E和HUFA对中华绒螯蟹幼蟹生长、体组成分、非特异性免疫性能及抗病力的影响维生素E能否有效保护高度不饱和脂肪酸(HUFA)免受脂质过氧化呢?为了探讨此问题,我们配制了维生素E添加量(0和200mgkg-1饲料)和HUFA添加量(0%和1%)的五组等氮等脂的饲料,分别为E-HUFA,-E+HUFA,+E-HUFA,+E+HUFA,进行了42天的养殖试验,结果显示：+E+HUFA组幼蟹的增重率显著高于其他各组;+HUFA组的体脂肪含量相对HUFA组幼蟹有增加的趋势；幼蟹肝胰腺中维生E含量与饲料中维生素E含量成正相关；+E+HUFA组的肝胰腺中MDA含量显著低于E+HUFA组；+E+HUFA组的血淋巴呼吸爆发能力显著高于其他各组；+E+HUFA组和+E-HUFA组血清溶菌酶活力显著高于其他各组；-E-HUFA组幼蟹的累积死亡率显著高于其他各组。本研究显示维生素E可以保护HUFA免受脂质过氧化;HUFA能够提高幼蟹的生长性能、非特异性免疫性能和抵抗病菌感染的能力。3.氧化鱼油中添加维生素E对中华绒螯蟹幼蟹生长、抗氧化性能、非特异性免疫性能以及抗病力的影响维生素E是否可以缓解氧化鱼油对中华绒螯蟹造成的损伤作用呢?为了探讨此问题,我们设计了9组等氮等脂饲料,其中包含三个维生素E水平(0,100和300mgkg-1饲料)和三种氧化程度(13.4meqkg-1,48.9meqkg-1,119meqkg-1)的鱼油,进行了为期10周的养殖试验,结果显示：高度氧化鱼油(119meqkg-1)显著降低了幼蟹的增重率；中度氧化鱼油(48.9meqkg-1)和高度氧化鱼油显著降低了幼蟹的成活率和饲料效率。维生素E添加100mgkg-1组显著降低了幼蟹肝胰腺中的MDA含量。高度氧化鱼油组血清中的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶显著低于新鲜鱼油组(13.4meqkg-1)口中度氧化鱼油组；维生素E添加100mgkg-1组的血清超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶显著高于添加0和300mgkg-1维生素E组。未添加维生素E组的血清溶菌酶和酚氧化酶活力显著低于添加100mgkg-1和300mgkg-1维生素E组。感染嗜水气单胞菌实验显示高度氧化鱼油组的累积死亡率显著高于新鲜鱼油组和中度氧化鱼油组；添加维生素E则显著增强了幼蟹抵抗嗜水气单胞菌的感染能力。结果表明维生素E的添加,可以缓解氧化鱼油对幼蟹造成的损伤,提高了幼蟹的抗氧化能力和抗病力。4.氧化鱼油饲料中添加维生素E对应激蛋白Hsp70,硫氧还Trxl和抗氧还蛋白Prx6基因表达的调节作用环境胁迫能够诱导应激蛋白Hsp70基因的上调表达,氧化应激则会诱导Trxl和Prx6基因产生过表达；而Trxl和Prx6可以保护机体免受各种氧化应激的损伤。通过添加功能性营养素可调节以上相关基因的表达。本研究中维生素E和氧化鱼油实验结果表明,高度氧化鱼油显著上调了幼蟹肝胰腺中Trxl,Prx6和Hsp70基因表达；维生素E则显著下调了幼蟹肝胰腺中Trxl,Prx6和Hsp70基因表达；高度氧化鱼油中未添加维生素E组,幼蟹肝胰腺中Trxl和Prx6基因表达显著高于其他各组。在氧化应激下,Trxl,Prx6和Hsp70基因均产生过表达,而适量添加维生素E则可以降低这些基因的表达,这可能是通过缓解氧化应激而间接地调控了以上基因的表达。5.饲料中不同维生素E和C的可能交互作用对中华绒螯蟹幼蟹生长、抗氧化性能的影响本研究中的前期部分实验结果中,发现维生素E和维生素C之间可能存在一定的联系,为了验证维生素E和维生素C对中华绒螯蟹的生长、抗氧化性能等方面是否存在交互作用,我们设计了9组等氮等脂饲料,其中包含三个维生素C水平(0,100(?)300mgkg-1饲料)和三种维生素E水平(50,100(?)300mgkg-1饲料),9组饲料分别标记为C0+E50,C0+E100,C0+E300,C100+E50,C100+E100,C100+E300,C300+E50,C300+E100,C300+E300,进行了为期8周的养殖试验。结果表明,幼蟹肝胰腺中维生素E和C含量均随着饲料中维生素E和C的提高而增加,而肝胰腺中的维生素C的含量则随着饲料中维生素E的提高反而呈现降低趋势；C100+E100组幼蟹的血淋巴呼吸爆发活力显著高于其他各组,维生素E和C在血淋巴呼吸爆发方面呈现出交互作用；在肝胰腺中,CO+E50组和C300+C300组中的SOD活力显著高于其他各组；C300+E100组和C100+E100组中,幼蟹肝胰腺中DHA含量显著高于其他组,C300+E50组中,幼蟹肝胰腺中EPA组成百分比显著高于其他各组,维生素E和C在幼蟹肝胰腺中EPA组成百分比方面表现出交互作用。维生素E和C对幼蟹肝胰腺中Trxl和Prx6基因表达均有显著影响,其中E100+C100组幼蟹肝胰腺中Trxl和Prx6的基因表达量最低。本研究结果显示维生素E和维生素C之间存在交互作用,适当添加维生素C可以节约维生素E；维生素E和维生素C添加量过低或过高均会产生氧化应激,综合本实验对幼蟹生长性能、抗氧化,免疫指标及基因相对表达测定结果,建议在饲料中添加维生素E100mgkg-1饲料和维生素C100mgkg-1饲料。
【作者】王立改；
【导师】陈立侨；
【作者基本信息】华东师范大学，动物学，2014，博士
【关键词】中华绒螯蟹；维生素E；脂肪；氧化鱼油；抗氧化；非特异性免疫；抗病力；基因表达；

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